一抗選擇新技能:
1、抗體的說明書中明確指明可用于WB檢測的是選擇。但沒寫不表示不能做,可能**沒有驗(yàn)證,如果確實(shí)需要這個或者只有這一個,可以向**申請?jiān)囉醚b哦。
2、抗體適用的種屬也是需要考慮的。說明書中也會寫明,如果研究樣本的來源物種不在列表里,也并不代表就不能使用,不過zui好不用。當(dāng)然抗體的適用性與不同物種統(tǒng)一蛋白的序列相似性有關(guān),用信息學(xué)的方法比對一下可以預(yù)測抗體是否可用,如果同源性較高的話還是可以選擇的。
3、抗原類型也需要審視。免 疫原不限于蛋白,菌體或細(xì)胞都可以作為免 疫原,在選擇時要進(jìn)行區(qū)分。比如要檢測的是蛋白的區(qū)段或同型物,就要選擇用含此片段域的免 疫原制備出的抗體。
4、如果一抗是未標(biāo)記的,后續(xù)還需使用二抗,則選擇的一抗來源物種與樣本來源物種要避免相同導(dǎo)致交叉反應(yīng)。比如檢測大鼠組織內(nèi)目的蛋白,則zui好選兔抗鼠的一抗,而不選擇小鼠來源的一抗。如果一抗是標(biāo)記的,則可以不考慮這個問題。