PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應）是一種在體外模擬DNA復制過程的技術。通過設計特異性引物，PCR可以擴增目標DNA片段，使其在短時間內達到可檢測的水平。PCR主要包括三個階段：變性、退火和延伸。熒光定量PCR原理：熒光定量PCR在傳統(tǒng)PCR基礎上，引入了熒光標記技術。

根據熒光標記物的不同，熒光定量PCR可分為兩種：染料法和探針法。

1、染料法

染料法利用一種能與雙鏈DNA特異性結合的熒光染料，如SYBR Green I。在PCR反應體系中，染料與雙鏈DNA結合后，熒光信號增強。隨著PCR反應的進行，擴增產物不斷積累，熒光信號也隨之增強。通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，可以計算出目標DNA的初始濃度。

2、探針法

探針法采用一種特異性熒光標記的探針，如TaqMan探針。探針的5'端標記報告熒光基團，3'端標記淬滅熒光基團。在探針完整時，報告熒光基團的熒光信號被淬滅基團抑制。當PCR反應進行到退火階段，探針與目標DNA特異性結合，Taq酶的5'→3'外切酶活性將探針切斷，使報告熒光基團與淬滅熒光基團分離，熒光信號得以釋放。通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，可以實現(xiàn)對目標DNA的定量。