實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
雞輸卵管上皮細胞
細胞簡介：
輸卵管是卵子運輸、儲存、獲能，以及卵母細胞采取、運送、成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的重要場所。輸卵管上皮細胞體外培養(yǎng)可以用于飼養(yǎng)層細胞，與胚胎共培養(yǎng)，克服胚胎的發(fā)育阻滯現(xiàn)象。因此，體外培養(yǎng)輸卵管上皮細胞，不但可以進一步了解影響生殖微環(huán)境變化的因素，而且還可以建立輸卵管上皮細胞與胚胎共培養(yǎng)體系，研究輸卵管上皮細胞對胚胎體外發(fā)育的影響。
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組織來源
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產(chǎn)品規(guī)格
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貨號
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用途
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輸卵管組織
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5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
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A01X2308
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僅供科研研究實驗
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細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常輸卵管組織。
2)細胞鑒定：細胞角蛋白-18（CK-18）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 上皮 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人精氨酸酶（Arg）elisa檢測試劑盒
牛(SS)elisa分析檢測試劑盒
電鏡組織基吡啶固著液（2,4,6-Trimethylpyridine
puriss）
小鼠巨噬細胞炎性蛋白1α（MIP1α）elisa檢測試劑盒
大鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)elisa檢測試劑盒
人β淀粉樣多肽42(Aβ 42)elisa檢測試劑盒免費代測
體液甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質(zhì)譜法定量檢測試劑盒
小鼠微粒體甘油三酸酯轉運蛋白(MTTP)elisa檢測試劑盒
大鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa檢測試劑盒免費代測
鋅指蛋白347抗體 ZNF347
鋅指蛋白735抗體 ZNF735
補體C1qγ鏈多肽抗體 C1QC
成纖維細胞核受體Nr5a2抗體 NR5A2
DNA聚合酶δ 抗體 DNA polymerase delta
EDC3蛋白抗體 EDC3
磷酸化紅細胞**素受體抗體 phospho-EPO Receptor
(Tyr485)
磷酸化上皮鈣粘附分子抗體 Phospho-E Cadherin
(Ser838 + Ser840)
自噬相關蛋白4A抗體 ATG4A
組織蛋白酶H抗體 Cathepsin H
核纖層蛋白B抗體(細胞核膜標志物) [KO驗證抗體] Lamin B1
互養(yǎng)蛋白1,2,3抗體 Syntrophin-1+2+3
P53誘導細胞凋亡抑制蛋白抗體 NME5
PE-Cy7標記人CD279 (PD-1)單克隆抗體 human CD279
(PD-1)/PE-Cy7
神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2抗體 HRG1
水通道蛋白4單克隆抗體 Aquaporin 4
Caspase 9抑制劑1400ul
雞輸卵管上皮細胞小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa檢測試劑盒
猴催乳素(PRL/LTH)elisa檢測試劑盒免費代測
Nucleoporin 37kDa;
Nucleoporin Nup37; Nup107-160 subcomplex subunit Nup37; Nup37; NUP37_HUMAN;
p37.
雞輸卵管上皮細胞
大鼠NK細胞
NCI-H2052人間皮瘤細胞
小鼠氣道平滑肌細胞；ASMC （種屬鑒定）
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。
根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。
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