豬骨骼肌細胞
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產(chǎn)品名稱
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豬骨骼肌細胞
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產(chǎn)品規(guī)格
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5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
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組織來源
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肌肉組織
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生長特性
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貼壁培養(yǎng)
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細胞形態(tài)
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長梭狀細胞
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分類
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豬原代細胞
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貨號
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A01X2281
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用途
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僅供科研實驗
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細胞特性：
1）細胞來源于實驗動物正常肌肉組織。
2)細胞鑒定：肌動蛋白（α-actin）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代骨骼肌細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細胞簡介：
骨骼肌細胞（ Skeletal muscle cells）是人和動物體內(nèi)大的細胞之一，它們是由成肌細胞(Myoblasts)融合而來的多核細胞，故骨骼肌的形成是一個非常復雜的過程，并需要多種細胞信號通路的參與，包括phosphatidylinositol 3-kinase，calcineurin，STAT3和MAPK等。原代骨骼肌細胞的培養(yǎng)是研究細胞分化過程的有效的模型。
培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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