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RNA提取操作步驟

日期:2025-06-04 17:48
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摘要: RNA的提取是參照生物的提取試劑盒完成的。 1、離心機(jī)4℃預(yù)冷,準(zhǔn)備試劑:氯仿、異內(nèi)醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管,戴口罩、帽子、無粉乳膠手套; 2、取出轉(zhuǎn)染建模成功24h后的細(xì)胞,吸棄培養(yǎng)液,用1×PBS清洗1次; 3、每10cm2生長的細(xì)胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液槍吹打細(xì)胞使其完全脫落; 4、用移液槍反復(fù)吹吸裂解液直至無明顯沉淀,將裂解液全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)記好的1.5mL EP管...

RNA的提取是參照生物的提取試劑盒完成的。


1、離心機(jī)4℃預(yù)冷,準(zhǔn)備試劑:氯仿、異內(nèi)醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管,戴口罩、帽子、無粉乳膠手套;


2、取出轉(zhuǎn)染建模成功24h后的細(xì)胞,吸棄培養(yǎng)液,用1×PBS清洗1次;


3、每10cm2生長的細(xì)胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液槍吹打細(xì)胞使其完全脫落;


4、用移液槍反復(fù)吹吸裂解液直至無明顯沉淀,將裂解液全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)記好的1.5mL EP管中,室溫靜置5min;


5、往每個EP管中加0.2mL氯仿(Transzol Up體積的1/5),混勻振蕩30s,室溫靜置3min;


6、4℃條件下10000g離心15min,離心后RNA主要分布在上層水相中,體積約50%;


7、轉(zhuǎn)移上層水相于新的EP管中(約400μL,注意不要吸取到下層),每管加入0.5mL異丙醇 (Transzol Up體積的1/2),顛倒混勻,室溫孵育10min;


8、4℃下10000g離心10min后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀,吸棄上清,加1mL 75%乙醇吹懸沉淀;


9、4℃下7500g離心5min后棄上清,盡量吸凈,室溫晾干沉淀5min,依細(xì)胞量加入30~100μL的RNA溶解液;


10、55℃~60℃金屬浴10min,-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

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